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DNA提取方法簡(jiǎn)介
發(fā)布時(shí)間： 2021-10-22 點(diǎn)擊次數(shù)： 4204次一、DNA提取方法簡(jiǎn)介
1、基因組DNA的提取
1.1、CTAB法
1.2、SDS法
1.3、其它
2、非基因組DNA的提取
2.1、質(zhì)粒DNA的提取
2.1.1、堿裂解法
2.1.2、煮沸法
2.2、線粒體、葉綠體DNA的提取
差速離心結(jié)合SDS裂解法
1、基因組DNA的提取
1.2、SDS法 SDS法原理
SDS是一種陰離子去垢劑，在高溫（55～65℃）條件下能裂解細(xì)胞，使染色體離析，蛋白變性，釋放出核酸； 提高鹽(KAc或NH4Ac)濃度并降低溫度（冰浴），使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀，離心后除去沉淀； 上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。 SDS法DNA提取緩沖液
改良的SDS法
水浴 60min, 其間緩慢搖動(dòng)幾次。加入150ul 的5mol/ LKac, 混勻, 冰浴15min 左右。
SDS法流程圖 （以動(dòng)物組織為例）
1.3、其它
根據(jù)細(xì)胞裂解方式的不同有：
物理方式
玻璃珠法
研磨法
超聲波法
凍融法
化學(xué)方式
異硫氰酸胍法
堿裂解法
生物方式
酶法
根據(jù)核酸分離純化方式的不同有：
吸附材料結(jié)合法
硅質(zhì)材料
高鹽低pH值結(jié)合核酸，低鹽高pH值洗脫。快捷高效。
陰離子交換樹脂
低鹽高pH值結(jié)合核酸，高鹽低pH值洗脫。適用于純度要求高的實(shí)驗(yàn)。
磁珠
磁性微粒掛上不同基團(tuán)可吸附不同的目的物，從而達(dá)到分離目的。
濃鹽法
利用RNP和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離
有機(jī)溶劑抽提法
有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制核酸酶的降解作用
密度梯度離心法
利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物
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