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ELISA雙抗體夾心法

發(fā)布時間： 2021-10-22　　點擊次數(shù)： 1199次

簡介
ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。

材料與儀器
（1）包被緩沖液（pH 9.6 0.05 M 碳酸鹽緩沖液）
（2）洗滌緩沖液（pH 7.4，0.15 M PBS）
（3）稀釋液
（4）終止液（2 M H2SO4）
（5）底物緩沖液（pH 5.0）
（6）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）使用液
（7）2，2’-連氮基-雙-3-乙基-苯丙噻唑啉磺胺（ABTS）使用液
（8）抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體：按說明書處理。
（9）標(biāo)準(zhǔn)品：用稀釋液稀釋成梯度濃度溶液。
（10）96 孔聚苯乙烯塑料板（酶標(biāo)板）。

實驗步驟
用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。
加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，通過反應(yīng)也結(jié)合在固相載體上。
加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。
酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。
某些分泌型蛋白，用siRNA 干擾后可以用ELISA 進(jìn)行檢測。

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